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生物学论文_环指蛋白11调控Akt信号通路促进BM

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文章摘要:目的研究BMSCs成骨分化过程中环指蛋白11(ring finger protein 11,RNF11)对Akt信号通路的调节作用，为进一步阐明BMSCs成骨分化机制和用于临床治疗提供思路。方法从健康供体新鲜骨髓中分离培养BMSCs并传代，取第4代细胞经流式细胞术，成骨、成软骨和成脂诱导培养鉴定后用于实验。BMSCs于成骨分化培养基中培养0～14 d，通过茜素红染色和ALP染色检测其成骨分化程度，并用Western blot法检测RNF11表达情况。取第4代BMSCs，分为空白对照组（A组）、空载慢病毒（Lv-NC）组（B组）和敲低RNF11(LvShRNF11)组（C组），成骨诱导培养0～14 d，采用Western blot检测RNF11蛋白表达，茜素红染色和ALP染色检测其成骨分化程度，实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测BMSCs成骨标志物Runx2、骨钙素（osteocalcin,OCN）及骨桥蛋白（osteopontin,OPN）的mRNA相对表达量，采用Western blot检测Akt、Smad1/5/8以及β-catenin信号通路激活水平。为研究RNF11对Akt信号通路的影响机制，取第4代BMSCs分为Lv-NC转染组（A1组）、Lv-ShRNF11转染组（B1组）和添加Akt信号通路激活剂SC79的LvShRNF11转染组（C1组），采用Western blot检测RNF11蛋白相对表达量和Akt信号通路激活水平，以磷酸化前后的比值表示。结果流式细胞术、成骨、成软骨和成脂诱导培养鉴定显示分离培养细胞为BMSCs。RNF11蛋白相对表达量随成骨分化时间延长而逐渐增加（P<0.05）；下调RNF11后，茜素红和ALP染色示C组相较于A、B组BMSCs成骨分化程度降低，qRT-PCR检测示Runx2、OCN、OPN mRNA相对表达量减少（P<0.05）。成骨分化前后，RNF11蛋白相对表达量与Akt磷酸化水平上升（P<0.05）。下调RNF11后，C组相较于A、B组，其Akt信号通路激活水平显著降低（P<0.05），而对Smad1/5/8以及β-catenin信号通路激活水平无明显影响（P>0.05）。B1、C1组相较于A1组，其RNF11蛋白表达量减少（P<0.05）,B1组相较于A1、C1组，其Akt信号通路激活水平降低（P<0.05）；茜素红与ALP染色示C1组BMSCs成骨分化程度稍低于A1，而明显高于B1组（P<0.05）;qRT-PCR检测示C1组Runx2、OCN、OPN mRNA相对表达量稍低于A1组，而明显高于B1组（P<0.05）。结论 RNF11通过正向调控Akt信号通路激活水平促进BMSCs向成骨细胞分化。RNF11可作为提高BMSCs骨修复疗效以及治疗骨代谢病的潜在靶点。

文章关键词:

论文作者:邓雯¹ 龙婷² 杜英³

作者单位:2. 中山大学中山医学院 3. 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学系

论文分类号: R336

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文章来源：《中国组织工程研究》网址: http://www.zgzzgcyj.cn/qikandaodu/2021/1213/1914.html